利用血清筛选噬菌体文库

         利用含有目标受体的复杂混合物，对噬菌体展示肽文库进行筛选。这适用于许多令人感兴趣的生物体系，如血清、脑脊液及其他生物性体液和细胞或组织表面等。在此情况下，目标就是要鉴定出结合于特定受体分子或结合于一组具有特定性质的受体上的多肽。

我们及他人都在致力于鉴定那些可与疾病特异性相关的抗体（疾病特异性抗体，DS-Ab）相结合的多肽。这里我们所描述的方法，是用来鉴定丙型肝炎感染（HCV）特异性相关抗体的相应配体。HCV是一种性慢性肝病的主要病因。利用来自HCV感染者和非感染者的血清（以下分别称为阳性血清和阴性血清）进行噬菌体展示文库筛选。该实验方案涵盖了从构建噬菌体文库到鉴定HCV特异性抗体配体的全部实验步骤。本章所提及的大部分思路和实验方案同样适用于其他复杂的受体体系。

随机肽文库
目前主要有两种利用丝状噬菌体的噬菌体展示系统，均已被开发并广泛应用超过15年。外源肽段是以N端融合到次要（pⅢ）或主要衣壳蛋白（pⅧ）的形式进行表达的。区分这两种表达系统的特征是其每个噬菌体颗粒所展示的拷贝数目：在基于pⅢ的系统中，每个噬菌体展示拷贝数可从少于1个至多达5个；而基于pⅧ的系统中，每个噬菌体衣壳上却可以展示数十到数百个多肽。后一种特性业已证明在用血清筛选，尤其是对随机肽文库筛选时，具有更显著的优势。实际上，噬菌体表面上多肽的高拷贝展示，增加了噬菌体-抗体相互作用的亲和性，从而即使不是全部，也可以选择到血清样本中的大多数抗体。通过在体外将合成的随机序列克隆到展示载体上来构建文库，而后连接产物转化到细菌中。以前这zui后一步的效率将噬菌体文库复杂度限制在包含不超过108个不同序列以内。因此，随机肽文库通常只包含了所有可能序列的很少部分。我们已试图通过增加肽文库的有效复杂度来改进这种状况。用一种密码子为基础的方法合成随机序列，即每一位点仅有20个用于编码20个不同氨基酸的三联体密码子，如此就消除了密码子的简并性并剔除了终止密码子。
 

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