从噬菌体文库选择抗原特异性抗体

         从噬菌体抗体文库中分离抗原特异性抗体，是通过让噬菌体进入到在抗原上进行的重复性选择循环来实现的。理想情况下，仅需l轮选择即可完成。但事实是，丝状噬菌体常常非特异性地结合到支持物表面，从而限制了每轮所能获得的富集水平。实际上，需要2～5轮的选择。现在已设计了许多各自不同的选择方法；其中包括在固相支持物上包被抗原进行生物淘选，使用免疫亲和层析注或BIAcore传感芯片，用生物素化抗原选择E37J，多肽E383，在固定的原核生物E393或哺乳动物E403细胞、组织培养细胞E41-433、新鲜细胞上进行选择，采用分拣流程如FACS和MACS进行减数选择，在组织切片或组织断面上富集、内化选择E493以及原则上可在活体动物中选择，如在多肽噬菌体文库方面所报道的做法。更复杂的选择方法还包括“路径发现者/代理分子”Pathfinder/Proximol和一些建立在通过抗体抗原相互作用恢复噬菌体感染性机制之上的选择方法。总体上?选择方法可分为两大类：一类是用已知抗原尝试分离抗体；另一类是用噬菌体抗体作为研究工具来寻找未知的靶抗原（例如针对细胞表面的抗原）。

如果可以得到纯化抗原，选择将zui为有效。。虽然选择仅需少量抗原，但筛选所需要的抗原量就大了许多。总体上，500ug～lmg的抗原对于一系列选择和筛选是绰绰有余的。如果采用低浓度抗原并能储存及重复使用，那么，完成整个过程所用抗原量可少至100ug。通过采用封闭剂．如脱脂奶粉、明胶、酪蛋白、BSA或Tween20，可以抑制非特异性的噬菌体结合。

由于天然文库中每种噬菌体抗体的拷贝数很少，因此*轮选择条件要尽量采用非严谨条件。总体上，此阶段增加严谨性会适得其反，因为这会减少洗脱下来的噬菌体数目，同时并未增加阳性噬菌体的比例。*轮选择后，每种单个噬菌体抗体数目大幅提高，而随后洗涤的严谨性也可以加大许多。

zui常用的选择方法涉及用抗原包被的塑料免疫管（Nunc）。这种试管结合力可以达到每平方厘米650ng抗原。但潜在的问题是抗原表位会发生部分变性，结果造成所选择的抗体并不识别天然抗原。尽管这并不常见，但仍可加以避免。可先用抗原特异性抗体包被此免疫管，或者用可溶性生物素化抗原在溶液中通过链霉亲和素或亲和素磁珠捕捉抗原及其所结合的噬菌体。

有两种方法可有助于选择到更高亲和力的抗体。一种是在*轮后提高洗涤步骤的严谨性；另一种是在随后的各轮选择中降低抗原浓度。后种方法的前提是要用液相生物素化抗原的选择方法。这是由于固相支持物上的抗原会产生以亲和力为基础的选择。很典型的是，对于大容量无偏性的抗体文库，所用的起始抗原浓度为300～500nmol/L，而在其后每一轮选择时，抗原浓度都会降低5倍。
 

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