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免疫染色法检定蛋白质

更新时间:2013-01-16点击次数:1035

方法步骤:
1) 尿素洗过夜的转印纸再以10 mL PBST 洗三次,每次约10 min,均在上述方形培养皿中进行。
2) 转印纸放在明胶NET 溶液中反应,置室温中反应1 h。一般使用方形培养皿当容器,但亦可装入塑料袋中反应,较节省试剂用量。
3) 反应后,以PBST 浸洗二次。
4) 把转印纸放在抗体溶液中反应,置室温反应1 h。
5) 反应后以PBST 洗三次,改用酶联体反应,在室温下反应1 h。
6) 以PBST 洗四至五次,注意容器也要洗干净。
7) 加入DAB 基质溶液约10 mL 呈色,尽量避光,并且不时摇动呈色液。
8) 数分钟内可呈色,在背景加深前倒去DAB,以水冲过数次后晾干。

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