连接scFv和载体DNA并转化大肠杆菌

[器材和试剂]
● 去离子水（millipore）
● T4DNA连接酶和10×连接酶缓冲液（NEB）
● 16℃水浴
● 消化的scFv文库DNA
● pHENl DNA，用NcoI和NotI消化（100ng／ul）
● 电感受态大肠杆菌TGl细胞（Strat aeene）
● 用于将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备

[方法]
1．配制1个50ul连接混合液，包含：
● 10×连接缓冲液，5uI
● 水，16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul）， 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文库（100g/ul）, 7ul
● T4 DNA连接酶（400U／ul），2ul
2．16℃孵育反应液过夜。
3．乙醇沉淀DNA并用70％乙醇洗涤沉淀1次。
4．重悬DNA于10ul水中。
5．用4份相同的2．5ul的DNA分别电转化到电感受态大肠杆菌TGl细胞中。
6．确定文库容量，并将菌文库材抖储存于-70℃。

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