cDNA*链的合成

[方法]
1．为合成cDNA*链，在1个1．5ml硅化微量离心管中制备以下反应混合液，
● 10－RT缓冲液，5ul
● 20×dNTP， 5ul
● 100mmol/LDTT， 5ul
● Hu IgMFOR引物，2ul
● HuCκFOR引物， 2ul
● HuCλFOR引物， 2ul
● RNAsin，80U（2ul）
● 所有引物浓度均为10pmol/ul
2．取整数体积（1～4ug）存于乙醇中的RNA，放在1个无菌1．5ml微量离心管内，并用微型离心机离心5分钟。 用70%乙醇洗涤沉淀1次， 晾干， 并用24．5ul DEPC重悬。
3．将溶液加热到65℃持续3分钟，使RNA变性；冰上放置2分钟冷却，并加入到*链反应混合液中。加入2．5ul AMV反转录酶，42℃孵育1小时。
4．煮沸cDNA混合反应液，3分钟。用微型离心机离心5分钟。将含有cDNA的上清液转移至新的硅化管内，并用它尽快进行V基因的PCR扩增。

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